天然產(chǎn)物中的生物堿多含手性中心，不同對(duì)映體常表現(xiàn)出差異顯著的生物活性（如鎮(zhèn)痛、抗菌活性），精準(zhǔn)拆分其對(duì)映體是藥效研究與質(zhì)量控制的關(guān)鍵。

CHIRALCEL® OD-H 作為多糖衍生物涂敷型正相手性柱，以硅膠表面涂敷的纖維素 - 三 (3,5 - 二甲基苯基氨基甲酸酯) 為固定相，憑借緊密的螺旋手性空腔與生物堿的特異性相互作用，成為生物堿對(duì)映體分離的優(yōu)選工具。以下分享具體分離方法，兼顧選擇性與實(shí)用性。

一、實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備：適配 OD-H 手性柱的核心配置

1. 色譜柱選擇：優(yōu)先選用 OD-H 手性柱標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格（4.6mm×250mm，5μm 粒徑），搭配同系列保護(hù)柱（4.6mm×10mm），減少天然產(chǎn)物提取液中雜質(zhì)對(duì)柱床的污染，延長柱效；

2. 儀器與試劑：高效液相色譜儀（帶紫外檢測器或二極管陣列檢測器），試劑需為色譜級(jí) —— 正己烷（基礎(chǔ)溶劑）、異丙醇（改性劑）、二乙胺（堿性添加劑），以及待分析的生物堿提取液（如麻黃堿、苦參堿提取液）。

二、流動(dòng)相優(yōu)化：兼顧分離度與峰形

OD-H 手性柱分離生物堿的核心是烷烴 - 醇 - 堿性添加劑體系，利用固定相的氫鍵作用、空間位阻效應(yīng)與生物堿的氨基（-NH?）、吡啶環(huán)產(chǎn)生差異化結(jié)合：

1. 基礎(chǔ)體系：起始流動(dòng)相為正己烷 / 異丙醇 = 90:10（v/v），異丙醇作為極性改性劑，可調(diào)節(jié)洗脫強(qiáng)度 —— 生物堿保留過強(qiáng)時(shí)，可將異丙醇比例提升至 15%，縮短保留時(shí)間；

2. 添加劑引入：生物堿呈堿性，易與 OD-H 固定相殘留硅羥基吸附導(dǎo)致峰形拖尾，需加入0.1% 二乙胺（DEA）（體積比），抑制吸附作用，使峰形對(duì)稱因子控制在 0.9~1.2 之間；

3. 特殊情況調(diào)整：對(duì)結(jié)構(gòu)相似的生物堿（如麻黃堿與偽麻黃堿），可將柱溫降至 10℃，增強(qiáng)空間位阻差異，分離度（Rs）可從 1.8 提升至 2.5 以上，滿足基線分離要求。

三、樣品處理：適配天然產(chǎn)物復(fù)雜基質(zhì)

天然產(chǎn)物提取液含多糖、色素等雜質(zhì)，需預(yù)處理以避免污染 OD-H 手性柱：

1. 凈化步驟：取生物堿提取液（如乙醇提取液），用流動(dòng)相稀釋 5~10 倍，經(jīng) 0.5μm 有機(jī)相濾膜過濾，去除懸浮顆粒；若雜質(zhì)仍較多，可通過固相萃取柱（如 C18 小柱）凈化，保留生物堿組分；

2. 濃度控制：樣品濃度建議控制在 0.1~0.2mg/mL，進(jìn)樣體積 5~10μL，避免過載導(dǎo)致柱效下降 ——OD-H 手性柱對(duì)高濃度樣品的選擇性易受影響，可能出現(xiàn)峰形展寬。

四、色譜條件與實(shí)例：以麻黃堿分離為例

1. 核心參數(shù)：OD-H 手性柱（4.6mm×250mm，5μm），柱溫 25℃，流速 1.0mL/min，檢測波長 254nm（麻黃堿的特征吸收），流動(dòng)相為正己烷 / 異丙醇 / 二乙胺 = 88:12:0.1（v/v/v）；

2. 分離效果：在此條件下，D - 麻黃堿與 L - 麻黃堿的保留時(shí)間分別為 8.5min、10.2min，分離度達(dá) 2.8，峰形對(duì)稱，可滿足天然產(chǎn)物中麻黃堿對(duì)映體的定量分析需求。

五、方法優(yōu)勢與柱維護(hù)

1. 核心優(yōu)勢：OD-H 手性柱對(duì)生物堿的選擇性源于纖維素衍生物固定相與氨基的多重相互作用，無需復(fù)雜衍生化即可直接拆分，適配天然產(chǎn)物 “低損傷” 分析需求；

2. 柱維護(hù)要點(diǎn)：實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，需用正己烷 / 異丙醇 = 90:10（v/v） 以 0.5mL/min 流速?zèng)_洗 30 分鐘，去除殘留二乙胺與生物堿，再按此溶劑保存，避免固定相被強(qiáng)堿性物質(zhì)破壞。

通過上述方法，可高效實(shí)現(xiàn)天然產(chǎn)物中生物堿對(duì)映體的精準(zhǔn)分離，為生物堿類天然藥物的藥效機(jī)制研究與質(zhì)量控制提供可靠的分析手段，充分發(fā)揮 OD-H 手性柱在正相手性分離中的優(yōu)勢。